蘇木精和伊紅101:第一部分-方法和提示

蘇木精和伊紅染色是現代(和舊的!)組織實驗室中最常見的染色。這種染色技術概述了組織的結構，可用於病理診斷。

本文將從尼古拉的介紹但我們將深入研究汙漬、化學成分和方法，使您能夠在自己的實驗室中高標準地進行檢測。

一個五彩繽紛的角落

你會聽到蘇木精和伊紅被稱為“H和E”或“HE”染色(我們將使用H和E)。如果你足夠幸運，在有專門組織/顯微鏡實驗室的研究所工作，那麼他們可能會有專門的H和E工作站。隻要看看實驗室裏色彩斑斕的角落——工作站要麼在通風櫃中，要麼在下流工作台的頂部。

湖泊的染料

蘇木精是一種天然染料，是通過煮沸產於南美洲和西印度的原木提取的。這種提取出來的蘇木精實際上並不是一種很好的染料——用於組織學，它與一種金屬鹽結合。這種金屬鹽被稱為“媒染劑”——基本上，它有助於蘇木精與組織結合。最常用的金屬是鋁和鐵。如果你聽說過“蘇木精湖”，不要害怕!這些不是死海那樣的巨大染料體——“湖”一詞隻是指一種金屬鹽的蘇木精溶液(和一些額外的成分，但我們將在接下來的文章中討論H和E溶液的組成)。

都是藍色的

蘇木精被用來給細胞核染色。它通過媒染劑與組蛋白結合。要染色的載玻片通常在溶液中浸泡5分鍾。這段相對較長的時間確保了所有可用的綁定位點都已飽和。

當你把幻燈片從蘇木素溶液中取出時，幾乎所有的東西都是藍色的(包括染色架)!在這一階段，核將是深紫色/藍色/紅色，但下一階段將著色核深藍色，但顏色可以通過重複該方法中的某些步驟來調整。

發藍處理細胞

有兩個階段用於獲得藍色核。第一種方法叫做“分化”——將切片置於酸-醇溶液中，以去除多餘的染色。然而，剩下的結合在細胞核上的蘇木精仍然是非常深深的紫色。為了達到經典的H和E藍色，玻片要在自來水中衝洗，然後進行“藍化”步驟。這是在一個通常被稱為“斯科特自來水”的解決方案中完成的。

曙紅下

下一個階段是伊紅的作用。這種反染色劑用於染色細胞質、肌肉纖維等。這種粉紅色的反染色也有助於區分細胞中的核和非核成分。重要的是，在這個階段不要過度染色，因為這會導致組織/細胞不容易立即從細胞的某些部分解讀。

嗯,“有點兒…的”!

在組織學實驗室中最常用的伊紅是“伊紅Y”。這裏的“Y”代表“Yellowish”。對“有點兒…的”! !不是黃色，隻是有點黃。即使它染成粉色。伊紅Y是熒光素的衍生物。你可能遇到的另一種類型的伊紅是'伊紅B '。你能猜到“B”代表什麼嗎?它的帶青色的! !伊紅染色的機理還不完全清楚，但認為本質上是靜電。

玻片通常在伊紅中浸泡一到兩分鍾，然後用自來水衝洗。最好的做法是謹慎行事，邊看邊檢查，而不是放太久，盡管你可以通過將幻燈片放在有自來水的容器中去除一定數量的多餘汙漬。

H和E法

下麵是H和E染色的基本方案，我將其分為三個部分，包括脫水和補液步驟，假設您將從石蠟切片開始，並通過在合成介質中安裝。

脫水

一步	解決方案	時間	筆記
1	二甲苯	5分鍾	所有10級以下的步驟都應該在通風櫃或下流工作台中進行
2	二甲苯	5分鍾
3.	二甲苯	5分鍾	排掉多餘的二甲苯(4)
4	絕對乙醇	20秒
5	絕對乙醇	20秒
6	絕對乙醇	20秒
7	95%的乙醇	20秒
8	80%的乙醇	20秒
9	70%的乙醇	20秒
10	自來水	2分鍾	水槽裏的自來水在流動

H和E染色

一步	解決方案	時間	筆記
1	哈裏斯的蘇木精	5分鍾	先運行對照載玻片檢查次數和染色情況。
2	自來水	20秒	水槽裏的自來水在流動
3.	酸醇1%	5秒	5秒最大這個解中的時間
4	斯科特自來水	2分鍾	直到組織切片變成藍色
5	伊紅	2分鍾
6	自來水	20秒	在水槽裏放自來水，然後檢查滑梯。

一旦你達到了想要的染色效果，你需要在安裝之前再次脫水你的幻燈片。

組織內的細胞核應該是深藍色的，細胞質應該是粉紅色的。如果存在，則紅細胞呈紅色，纖維蛋白和肌肉呈深粉色，膠原蛋白染色呈淡粉色。

這與上麵的脫水表正好相反。從步驟9中的70%乙醇開始，再回到步驟1。在進行下一步之前，您應該讓多餘的液體排回相應的染色盤中。

載玻片應直接從最後的二甲苯孵育中安裝。我們將在以後的文章中介紹幻燈片的準備工作，但下周請回到這裏，我們將解釋H和E中使用的解決方案的材料、方法和頂級技巧。