PCR, qPCR和qRT-PCR
PCR是什麼?初學者的指南
如果你需要複製、測序或量化DNA，你需要了解聚合酶鏈反應。閱讀我們的PCR過程指南，並發現提示，以幫助您避免最常見的PCR陷阱。
閱讀更多設計qPCR引物的一步一步指南
qPCR引物設計有一點科學，有一點魔法，還有一點運氣。以下是幫助你為實驗設計最佳引物的科學方法。
閱讀更多使用雙增量Ct分析qPCR數據的4個簡單步驟
新qPCR嗎?下麵是兩種最常見的分析方法之一-雙增量Ct分析的快速總結。
閱讀更多棘手的位點定向突變:頑固突變的實驗故障排除
不幸的是，在許多實驗中，位點定向突變(SDM)並不總是以我們第一次所希望的方式工作。這裏有一些提示，可以幫助您排除麻煩的SDM反應的故障!
閱讀更多什麼是Cq (Ct)值?
不要被Ct值迷惑!我們將指導您了解它們是什麼、如何計算它們以及故障排除問題。
閱讀更多如何防止菌落PCR假結果
菌落PCR無需純化質粒，節省時間，降低成本。然而，令人困惑的結果比比皆是——但隻有在你沒有預料到的情況下。本文概述了虛假結果的主要肇事者以及如何預防他們。關於……的更全麵的概述
閱讀更多多重連接依賴探針擴增(MLPA)
多重連接依賴探針擴增(MLPA)是MRC-Holland於2002年開發的一種分子技術。簡而言之，MLPA是一種敏感的技術，可以快速有效地量化核酸序列。它在世界各地的許多實驗室都有應用，可用於檢測拷貝數的變化(如刪除或重複)。
閱讀更多定點誘變的技巧和技巧
有幾種不同的方法來實現定點突變。在這裏，我將給你一個快速介紹反向PCR和為什麼它是有用的，以及通過一個完整的協議SDM使用修改引物!
閱讀更多免疫pcr:一種高靈敏度的免疫檢測方法
多年來，研究人員一直依賴免疫檢測技術，如Western blotting、流式細胞術和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，但免疫pcr是一種相對較新的方法。通過將ELISA與聚合酶鏈式反應(PCR)相結合，免疫聚合酶鏈式反應提供了極高的檢測靈敏度。ELISA是一種分子被…
閱讀更多長連接單鏈寡核苷酸(LASSO)探針用於千堿基大小基因組區域的大規模多重克隆
在這次網絡研討會上，您將學習如何解決從基因組序列創建表達庫用於下遊分析的一個主要問題。LASSO克隆如何允許細菌、人類和人類微生物組基因組的大型開放閱讀框(orf)的多重克隆……
閱讀更多引物驗證是不可能的——現在怎麼辦?
你感興趣的基因的引物終於在郵件中到達了，你已經準備好弄清楚在那些珍貴的組織樣本中，你最喜歡的基因的表達水平是否提高了。就差最後一步了，你就可以繼續了。底漆驗證。這是一個標準程序，你在。
閱讀更多你應該做的qRT-rtPCR控製，但可能沒有
現在，每個男人、女人和狗都在做定量實時逆轉錄酶PCR (qRT-rtPCR)。這是一個測量你最喜歡的轉錄物表達水平的好方法。一般來說，定量PCR的一大優點(就像瑞士國旗一樣!)是它的高靈敏度。原則上，它可以檢測和量化一個分子的…
閱讀更多用基於pcr的方法量化等位基因表達
等位基因特異性表達可以發生在各種生物學原因，如基因印跡，或變異引起的差異轉錄，或單核苷酸多態性(SNPs)，或表觀遺傳改變。傳統的基於終點RT-PCR或qrt - pcr的方法隻能檢測來自特定基因的mRNA表達的整體水平，而不能檢測來自個體的mRNA轉錄本。如果你的項目需要更多……
閱讀更多決策，決策:如何為你的實驗選擇最好的qPCR探針
在我們進一步討論之前，我們必須弄清楚一些事情:RT-PCR與qPCR與RT-qPCR。太太太混亂,amirite ? ?它們都是指特定的分子生物學分析方法，但不幸的是，這些名稱是互換使用的，這可能會讓任何人都非常困惑。言歸正傳:RT-PCR是逆轉錄酶PCR的縮寫，…
閱讀更多如何在艱難的PCR中生存
我相信你們很多人都去過那裏。一切都進行得很順利，你的項目似乎進展得很順利。然後是這個聚合酶鏈反應。出於某種原因，它就是不管用。這是你記錄上的一個黑點。即使我有科學頭腦，我也必須……
閱讀更多用正確的PCR儀器放大您的PCR成功!
下麵是我們的主要功能，當你在購買新的PCR儀器時，要注意。
閱讀更多Microsoft Excel可以幫助您設置多井板
當你是qPCR或qRT-PCR的新手時，在你的實驗室筆記本上寫下所有東西，然後在添加試劑或樣品時乏味地標記出來，這是很常見的。人們通常從添加到多個樣品中的項目的主混合開始，如(Mg2+， dntp, 10X PCR緩衝液，添加劑，…
閱讀更多RT-qPCR插入染料或熒光探針?
實時定量聚合酶鏈式反應(RT-qPCR)的獨特之處在於，它以可量化的方式將目標基因的擴增與熒光信號聯係起來。目前，在設計RT-qPCR實驗時，有許多熒光工具包/方法可以考慮。然而，可以選擇的兩大類是熒光插層染料和…
閱讀更多寡聚物淨化方法:如何，為什麼和為了什麼?
我們當中有誰在實驗中不需要寡核苷酸呢?它是許多程序和技術的基石。根據目標的不同，為你的實驗設計合適的oligo是非常困難的。Oligos必須有合適的長度;適量的C-G、T-A;他們不能形成第二…
閱讀更多困擾你的PCR抑製劑
通常情況下，PCR的每件事都是正確的。你已經完美分離出模板DNA，使用無菌試管和針尖，使用幹淨的試劑，向PCR之神快速祈禱。然而，未知的東西仍然會打亂你的結果。這種未知的作用通常是PCR抑製劑。在你責怪它之前……
閱讀更多PCR陷阱:細節決定成敗
聚合酶鏈反應實際上是我在大學時學到的最早的實驗室技術之一。盡管有時被標記為相當基本的實驗室技能，聚合酶鏈反應並不總是如預期的那樣工作。這種“浮躁”的成功是由於PCR工作流程中的小細節或隱患，可能導致你看似簡單的實驗失敗。這個…
閱讀更多qPCR和RNAseq:絲鏈之戰!
在本次網絡研討會上，您將學習如何將qPCR與RNAseq等新技術結合使用，以及這將如何幫助您的研究。本次網絡研討會的主要內容包括:什麼時候應該選擇RNA-seq而不是qPCR單獨進行表達分析，為什麼和如何驗證RNAseq……
閱讀更多分而治之:如何建立你的第一滴數字PCR實驗
液滴數碼PCR嗎?很容易。因為我們是來指導你的。我們最近向您介紹了數字PCR技術的原理以及它與qPCR的區別。簡單地說，數字PCR是一種將單個PCR分割成大量分區，然後進行PCR的端點PCR技術……
閱讀更多如何選擇正確的逆轉錄方法
定量反轉錄PCR (RT-qPCR)是實驗室常用的檢測和量化樣本中RNA表達的方法。實驗的第一步是通過逆轉錄(RT)將不穩定RNA轉化為互補DNA (cDNA)。事實上，RT是各種分子生物學的第一步……
閱讀更多小粒子很重要!-介紹納米顆粒PCR
有許多不同的方法和協議可以使你的PCR運行得更有效。我最近發現了一種有趣的PCR方法，叫做“納米顆粒”PCR。這種方法似乎吸引了很多關注，因為它使PCR提高了幾個數量級。更有趣的是，雖然增強效果已經在一個…
閱讀更多MassTag PCR介紹
進行PCR的新方法一直在出現。這說明了技術進步的速度，並反映了持續需要跟上快速發展的研究。我們都知道，PCR的主要目的是根據序列特異性引物擴增一段核酸。如今，PCR技術種類繁多，…
閱讀更多反向轉錄:最常見的陷阱!
優質的起始材料是反轉錄的王道!在任何實驗中獲得可靠的結果都需要充分的準備。我們經常認為逆轉錄是理所當然的，我們並不總是考慮到我們的qPCR可能因為這一步的問題而表現不佳。因為通常是逆轉錄反應本身引起了混亂……
閱讀更多更快的PCR優化
所以，你已經設計了PCR引物來放大你感興趣的序列，你已經準備好了。但除非你有源源不斷的模板、聚合酶和帶有梯度功能的熱循環器——更不用說大量的時間和耐心了——否則你可能不想花下一周的時間來尋找完美的條件……
閱讀更多多重PCR技術到底是什麼?
加入Dr. Karen O 'Hanlon Cohrt對多重PCR技術的實踐之旅，在那裏您將學習以下和更多:多重PCR技術背後的原理，這種技術的流行應用如何建立這種反應的優點和缺點多重PCR可以使您的研究受益Dr. O 'Hanlon Cohrt將討論…
閱讀更多專性qPCR標準曲線
乍一看，實時聚合酶鏈反應看起來是一種非常簡單的技術——非常直接。此外，當實時聚合酶鏈反應得到優化後，會產生有趣的結果。然而，為了獲得反映現實的一致和準確的結果，良好的對照對SYBR qPCR至關重要。這些控製之一是qPCR標準曲線，以檢查引物的效率。高效的引物……
閱讀更多像專業人士一樣洗牌DNA
DNA洗牌以一種非常有創意的方式使用了PCR技術。它允許你修改你的蛋白質來製造你想要的新蛋白質。你可以在你自己的實驗台上用微型離心管進化蛋白質。那不是很棒嗎?DNA洗牌也是一種非常強大的定向分子進化技術。W. Stemmer第一次使用…
閱讀更多從革命到進化:莖環實時PCR
Kary Mullis在1985年發明了聚合酶鏈反應(PCR)，開創了分子生物學技術的革命。但這並沒有停止。多年來，PCR有了很大的發展。今天，我們已經可以實時克隆微rna (mirna)了!由於miRNA的大小(約18-21個核苷酸長)和不同的表達水平，…
閱讀更多實時聚合酶鏈反應摘要
在聚合酶鏈反應(PCR)發明30多年來，它已經成為分子生物學家的謀生技術。它不可或缺的秘密在於它的簡單和多用途。這項技術的許多變種已經被開發出來;其中，實時熒光定量PCR已經成為定量…
閱讀更多qPCR數據的相對定量方法。是的，不止一個。
大家可能都知道，從qPCR數據計算相對基因表達的方法包括:a)雙增量Ct (ΔΔCt)和b)另一種方法。你可能已經超出了ΔΔCt方法的範圍，但你應該做好準備，以防你麵對不同擴增效率的引物集。這兩種方法都需要…
閱讀更多解碼癌症:處理細胞異質性的實用建議
在這次網絡研討會上，您將了解細胞的基因分型過程——特別是腫瘤細胞——以及分析結果數據的實用建議。我們將涵蓋的要點是:為您的基因分型實驗收集和準備樣本的實用建議和方法。對您的基因分型結果可用的數據分析方法的概述。
閱讀更多基本PCR故障診斷清單
常規PCR嗎?說實話，根本就沒有這回事。即使是最簡單的PCR反應也可能出錯，所以你需要有一個很好的PCR故障排除和糾正問題的想法清單。今天我頭腦風暴了所有我能想到的方法來處理標準PCR反應的問題....
閱讀更多當涉及到敏感的qPCR時，SPUD是你的芽
他們首次嚐試了一種全新的技術。然後，就需要跨越重重障礙，試圖讓一種既定的實驗室技術發揮作用。與後者相比，前者預計將充滿艱辛。然而，排除一個老的實驗室技術不再工作，是令人沮喪的一個全新的水平....
閱讀更多是時候啟動嵌套PCR了
如何獲得更純的PCR產物並減少非特異性擴增除非你已經有了一些神奇的特異性引物，否則隻擴增你的目標序列而不進行非特異性擴增是非常具有挑戰性的。謝天謝地，一個聰明而又簡單得令人驚訝的解決方案就在眼前!在PCR中，你設計你的…
閱讀更多嗜熱細菌如何生存，第二部分:DNA
在第一部分中，我回答了這個問題:“嗜熱菌中的蛋白質如何在高溫下存活?”在這一部分，我將看看核酸是如何在對我們大多數人來說太熱，但對一些有機體來說卻很理想的條件下生存的，包括給我們Taq聚合酶和……
閱讀更多你準備好你的第一個qPCR了嗎?
希望你早餐吃多了，因為第一次qPCR需要時間。你記得把咖啡杯倒滿了嗎?qPCR中有很多複雜的東西需要你的神經網絡活躍起來。與傳統PCR不同的是，qPCR測量的是DNA的擴增…
閱讀更多