RNases:他們的邪惡超能力解釋(以及你如何擊敗他們)

rna酶就像實驗室酶中的壞蛋超級英雄。他們無所不能，具有破壞性，似乎堅不可摧。

這是因為它們是由邪惡的統治者創造的，唯一的目的就是讓勇敢的科學家們的生活變得困難，他們每天都在為生產高質量、完整的RNA製劑而戰鬥。

好吧，我是開玩笑的。但為什麼rna酶有這些超能力呢?你能做什麼來打敗他們?讓我們一探究竟。

rna酶的超能力。

rna酶是萬能的

這是真的。rna酶存在於從原核生物到真核生物的所有細胞類型和生物中。也就是說，他們無處不在。這就是為什麼它們在實驗室中是個問題的主要原因之一。它們漂浮在空氣中，在你身體的每一個表麵。這意味著它們會汙染空氣或身體表麵接觸過的任何東西。這基本上是一切。此外，RNase A對玻璃的吸附非常強，這使得它更難從瓶子中去除。

rna酶具有很強的破壞性

RNA酶通常對其底物(RNA)具有非常高的比活性。這意味著最少量的RNase可以很容易地撕裂你寶貴的RNA製劑。順便說一句，這也是RNase (RNase A)是第一個被推導出其催化機製的酶的原因之一。Findlay等人，1962年）.

rna酶似乎堅不可摧

它們在高壓滅菌後顯示出鳳凰般的恢複

傳統的觀點認為，如果你用高壓滅菌器加熱rna酶，它們會變性，但在冷卻後會變性並重新獲得部分功能。這種驚人的、傳說中的堅韌是由一係列分子內的二硫鍵實現的，即使在通常維持3D蛋白質結構的氫鍵斷裂後，這些鍵也能保持結構的完整。就像所有的寓言一樣，這在某種程度上是正確的。但繼續往下讀，我們就會發現，RNase Baddies公司的公關專家們已經把這種特殊的超能力大肆渲染了一番。

即使是EDTA也阻止不了他們!

與其他核酸酶不同，許多RNA酶不需要金屬離子催化，因為它們使用RNA底物的2-prime羥基作為反應物種。因此，簡單地添加TE不會抑製它們，就像對dna咀嚼核酸酶那樣。

如何打敗邪惡的RNases

科學家們，不要煩惱。rna酶可能是可怕的敵人，但它們也有我們可以利用的弱點。

踢他們的H

rna酶依賴於其活性位點上的組氨酸殘基進行催化。因此，焦碳酸二乙酯(DEPC)是一種組氨酸特異性烷基化劑，可以使它們失活。然後，高壓滅菌將除去DEPC，以阻止它堿化你或你的樣品中的任何其他蛋白質。

在某種程度上，高壓滅菌法確實有效

傳說中的rna酶在高壓滅菌麵前的不可摧毀性在本質上是正確的，但正如我上麵提到的，也被過度炒作了。Ambion的一個小研究表明RNase(或至少RNase A)並不完全抗高壓滅菌。相反，它們的活性被高壓滅菌破壞，但一小部分RNase活性在高壓滅菌後仍然存在。

但是少量的RNAse仍然有很強的RNA咀嚼能力。這意味著常規的高壓滅菌作為RNase去汙程序的一部分當然是值得的——隻是你不能依靠它來去除所有的活動。

他們受不了(幹)熱

雖然濕熱(高壓滅菌)會部分破壞rna酶，但它們不可能抵抗幹熱。幹熱氧化rna酶-任何其他蛋白質，無論它們多麼健壯。所以要清潔玻璃器皿，在180度的溫度下清洗幾個小時就可以了。

化學戰爭

對於清潔表麵，rna酶，盡管它們很堅固，但不能忍受過氧化氫、強酸/堿、Trizol等物質。這些都是通常用來去除最堅硬的rna酶。

RNases的克星:抑製劑

也許我們武器庫中對抗rna酶最好的武器就是rna酶抑製劑。最常見的是，商業RNase抑製劑是胎盤核糖核酸酶抑製劑(RI)的版本。作為一個花了一年時間在沒有RNase抑製劑的幫助下試圖完善RNA原位雜交的人(由於我老板的虛假經濟!)，我知道這個RNase氪石有多好。一微升的RI，我的實驗就開始起作用了。

我說這是我們武器庫中對抗RNase的最好武器，因為與上麵列出的所有其他解決方案不同，RNase抑製劑是特定的，所以你可以(通常)把它們放在你的工作流程中重要的地方，並獲得你所需要的保護。如果你在研究RNA，千萬不要沒有這個東西。