Sequencing-by-Synthesis:解釋Illumina公司測序技術

所使用的“sequencing-by-synthesis”技術現在Illumina公司最初由Shankar Balasubramanian大衛Klenerman劍橋大學。他們成立了公司1998年商業化Solexa測序方法。Illumina公司繼續購買Solexa 2007年和已經建立,並迅速改善原始技術。

數以百萬計的反應和可逆的結束符

Solexa / Illumina公司測序方法類似於Sanger測序,但它使用包含終結者這街區進一步修改的核苷酸聚合,所以隻有一個基本可以添加一個聚合酶DNA複製鏈增長。測序反應上同時進行大量(數百萬事實上)不同的模板分子在固體表麵傳播。終結者還包含一個熒光標簽,可以檢測到攝像頭。隻使用單個熒光顏色,所以每個的四個基地必須添加在一個單獨的DNA合成和成像的循環。以下四個核苷酸的模板,終端的圖像記錄和刪除。這個化學反應叫做“可逆終止劑”。最後,另一個核苷酸的增加的四個周期開始。因為單基地被添加到所有模板以一種統一的方式,DNA序列的測序過程產生一組讀的統一的長度。

雖然熒光成像係統用於Illumina公司測序不夠敏感的檢測信號從一個模板分子,Illumina公司方法的主要創新模板分子在固體表麵的放大。DNA樣本準備成“測序圖書館”,每個大約200基地長分裂成碎片。自定義適配器添加到每個終端和圖書館流過固體表麵(“流動池”)和模板片段綁定到這個表麵。下麵這個,固相“橋放大”PCR過程(集群代)創建大約一百萬張緊每個模板的物理集群flowcell表麵。Illumina公司大幅提高了圖像分析技術,允許更高的集群密度flowcell的表麵上。

世界上第一

Illumina公司現在的主要供應商高通量DNA測序機器。根據OmicsMaps網站Illumina公司在全球擁有1145的機器,與836年相比,所有其他供應商!Illumina公司機器通常產生以來最高的收益率,他們負責更大一部分DNA序列信息的總基地化驗。Illumina公司目前幾個版本的DNA測序機器,所有的使用基本相同的樣本準備工具和測序技術。HiSeq的生產產量最高(750億基地,或Gb)每個樣本的最大讀長度100基地從每個模板的兩端。一個典型的“HiSeq”八個樣品在11天內運行流程。“MiSeq”是一個更便宜的機器,序列每運行一個示例。“MiSeq”跑得更快(4-24小時),但產生更少的數據樣本——從200 Mb到2 GB的數量取決於周期。“MiSeq”能夠閱讀150個基點從每個模板分子,但250個基點讀取目前正在測試。