10種免費工作的方法
與RNA合作?多麼有趣!那些微小的,幾乎堅不可摧的rna酶無處不在——在你的皮膚和粘膜上,在水裏,在你使用的(一些)酶上,在實驗室表麵,甚至在空氣中的微生物中!這裏有10種方法可以阻止rna,並保護你珍貴的樣本安全:
1.幹淨的一切;工作台表麵,移液管,電泳設備和任何你能想到的RNase清潔產品,如來自Ambion的RNaseZap(或0.5% SDS加3%H2O2)。建立有規律的清潔程序;每天快速清潔,每周或每月深入清潔,並堅持下去。
2.對待你的解決方案.好的老DEPC是保持解決方案不受RNase影響的好方法。使用0.5 mL DEPC/L,孵育2小時,高壓滅菌釜至少45分鍾。DMPC也可以使用,可能比已知的致癌物DEPC更安全。或者,許多供應商提供認證的無核酸酶水,這可能是值得投資的。注意,超濾水已經不含RNase,因此不需要DEPC處理。另外,不要在基於tris的解決方案上使用DEPC/DMPC。
3.指定一個工作空間,以及一組移液器,如果可能的話,專門用於無rnase的工作。
4.使用屏障提示.屏障尖端通過防止氣溶膠到達移液管來防止試劑和樣品的交叉汙染。它們是RNA工作的必備材料。
5.戴上手套,穿上白大褂.最明顯的是最好的。手套和白大褂可以防止你的樣品被自己的rna汙染。兩者都要經常更換(白大褂可能每周更換一次)。此外,當你戴上手套後,不要觸摸任何未消毒的東西——門把手、水龍頭、你自己或其他人(!)
6.烘烤你的眼鏡。沒有哪種酵素能承受300°C烘烤2小時,但你的眼鏡可以。
7.使用消除內源性RNA酶的方法分離RNA,例如多目標製藥公司的AquaRNA,既幹淨又方便。
8.使用不含rnase的酶.從細菌中分離出來的酶(如脫氧核糖核酸酶)可以充滿核糖核酸酶。在可能的情況下,確保在你的RNA樣本上使用經過認證的無rnase酶。
9.使用RNase抑製劑當不可能保持完全無rnase的時候。羅氏的保護者就是一個很好的例子。避免高溫(超過60°C)或變性條件,可能使抑製劑失活!
10.將RNA儲存在乙醇中在-80°C。如果樣品要多次使用,應作等份,以避免凍融循環。使用前,用離心機將RNA顆粒化,風幹,然後在無rnase緩衝液中重懸。
11.要完全偏執,工作時盡量遠離你的同事,每天用RNaseZAP洗澡五次。隻是開玩笑。
2的評論
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你一定是登錄發表評論。
嘿,
如果試管中沒有rna和dna酶,則不需要高壓滅菌。
凍結在Trizol是一個很好的選擇。試著解剖並立即放入Trizol冷凍。
祝你好運
非常好的建議。我用的是人的股外側肌。我們在不含RNase的水中衝洗,並在液氮中快速冷凍組織,以便稍後提取RNA。低溫瓶被標記為無RNase,並在使用前經過高壓滅菌。然而,我們從這些樣本中得到的RNA產量非常低。
我們要在冷凍前給肌肉加三唑嗎?
歡迎提出任何建議。
謝謝