PCR的問題?嚐試添加劑

您已經嚐試了所有常規方法，並檢查了底漆兩次測序，但仍然無法擴增出PCR片段。是時候進入PCR添加劑的奇怪世界了。多年來，各種添加劑已被證明可以在某些情況下增強PCR反應。以下是一些幫助解決PCR問題的PCR添加劑的摘要:

• DMSO溶液:認為減少二級結構，可以抑製聚合酶的進展。對GC富模板特別有用。最終濃度為5-10%。
• 甘油:同樣減少二級結構。使用5 - 10%
• 一水甜菜堿:也作用於二級結構的形成。使用最終濃度為1至3M。
• BSA:對於可能被腐殖酸汙染的模板非常有用(例如，被土壤汙染的環境樣品)，也有報道可以防止反應成分粘在管壁上。用量高達0.8 mg/ml。
• Tween-20:可以中和模板DNA製備過程中殘留的SDS，從而抑製反應。使用0.25至1%的最終濃度。
• 甲酰胺:提高引物退火的嚴格度，減少非特異性引物，提高擴增效率。濃度範圍:1-10%。
• 四甲基氯化銨:類似於甲酰胺的作用。試試10-100mM的濃度。
• 7-deaza-2的脫氧鳥苷:一個dGTP模擬，對GC豐富的模板特別有用。成功報告了高達83%的GC。使用1:3比例的dGTP:7-deaza-2 ' -脫氧鳥苷。

請進一步閱讀，以獲得關於其中一些問題的更深入的討論添加劑．或者，如果這些對你不起作用，你可以試試非傳統的添加劑．

聚合酶鏈反應添加劑的缺點是成功或失敗是非常具體的-一些東西在一次聚合酶鏈反應中起作用，不一定在下一次聚合酶鏈反應中起作用。盡管如此，這些試劑為您的PCR工具箱增加了另一個維度，盡管這是一種非常經驗的方法，使用不同的添加劑進行一些反應通常可以得到結果，並將您從令人沮喪的情況中解救出來。

想要更多這樣的文章寄給你?那為什麼不呢訂閱我們的訂閱?

最初發表於2007年9月2日。2016年4月29日更新修訂。