毛細管凝膠電泳:SDS-PAGE的替代方案?

當你想到分離蛋白質時，你會想到用凝膠來分離它們嗎?具體使用sds - page？如果你回答“是”，那是有充分理由的。SDS-PAGE在分子生物學實驗室中無處不在，因為它善於分離蛋白質。然而，SDS-PAGE需要大量的時間和勞動密集型。那麼，讓我們擴大你的工具箱，看看另一種分離蛋白質的方法:毛細管凝膠電泳。

毛細管凝膠電泳(CGE)又稱毛細管篩分電泳，又稱sds -毛細管凝膠電泳，通過充滿分離介質的柱分離凝膠中的蛋白質。

設備需求

在毛細管凝膠電泳中，你的分析物(你想要研究的蛋白質)通過電場的拉力通過毛細管在電解溶液中遷移——這與我們更熟悉的SDS-PAGE沒什麼不同。為了進行CGE，您需要:一個樣品瓶，源瓶和目標瓶，篩分基質，毛細管柱，柱上檢測器，數據輸出和處理設備和高壓電源。

在短暫的協議

在CGE實驗中，樣品從源瓶開始，向目的瓶移動。以下是協議的簡要內容:

步驟1:源、目的小瓶以及連接它們的毛細管中充滿電解溶液，樣品被引入毛細管中。

步驟2:一旦施加電場，分析物就會從源瓶側遷移到目的瓶側。

步驟3:列上檢測器(毫不奇怪)允許列上檢測。探測器將數據發送到數據輸出和處理設備，如計算機。

步驟4:這些數據然後顯示為電泳圖。你的分析物被解讀為各種保留時間的峰值。

要了解更多關於如何工作的詳細信息，請訪問加州大學戴維斯分校的有用材料．

關於矩陣的更多信息

你的篩分基質可以由許多聚合材料組成，包括交聯聚丙烯酰胺，右旋糖酐和聚(乙二醇或環氧乙烷)。柱通常由可更換的篩分聚合物製成。然後就看你是自己做專欄還是買專欄了。貝克曼庫爾特，安捷倫科技和Bio-Rad實驗室出售篩分套件，但知道這些需要你使用他們的CGE儀器。

為什麼要使用CGE

現在你已經聽說了什麼是CGE，為什麼你應該使用它?

• 它的操作時間更短。CGE電泳的完成時間是平板凝膠電泳的10-100倍。
• CGE實驗的步驟比SDS-PAGE實驗的步驟少。這是因為CGE實驗的最終結果是由與儀器相連的計算機給出的。
• CGE也比傳統的SDS-PAGE更適合小蛋白質。
• 你可以用CGE實時分析你的蛋白質。
• CGE設備可重複使用，無需製作無窮無盡的凝膠。
• 最後，大部分過程是自動的。添加示例之後，就完成了!這意味著你不需要像做凝膠那樣監督這個過程，也不需要在凝膠運行後立即將它帶到特殊的檢測設備上。

為什麼你不應該使用CGE

好吧，說實話，盡管CGE已經以現在的形式存在了十多年而且雖然取得了許多技術進步，但CGE仍然存在可重複性問題。另一個問題是CGE分離是串聯進行的。這意味著在CGE中，你不能方便地比較車道。最後，在2D凝膠方麵，CGE無法與傳統的2D分離技術競爭。

總之，雖然有些研究人員都在自豪地驚呼使用盡管CGE技術有很多優點，但仍存在一些問題。但不要忽視CGE !這一領域的最新進展是微芯片CGE，它在高速蛋白質分析方麵顯示出很大的前景。所以下次你想到蛋白質分離的時候別忘了CGE。

你試過CGE嗎?與SDS-PAGE相比，你覺得它怎麼樣?