運行一個完美的自製SDS-PAGE凝膠的實用指南

作為生物化學家，我們經常跑步sds - page來分析我們的蛋白質。獲取一份“像樣的”出版凝膠是一項重複而乏味的任務(特別是當有這種凝膠的時候)西方的屁股但如果你知道竅門就不會了!

以下是我的完美凝膠指南:

把玻璃板擦幹淨

小心盤子上的凝膠碎片，因為它是造成凝膠泄漏和缺陷的小惡魔。

如果你正在處理敏感樣品(例如rna -蛋白質複合物)，一定要記得噴灑少量70%乙醇/DEPC水放在盤子上，擦幹。

停止SDS-PAGE凝膠泄漏(第一個檢查點)

我在這裏使用的是BioRad術語，但從技術上來說，它與其他品牌的設置是相同的。

遵循以下步驟，防止凝膠在聚合前泄漏:

• 將玻璃板插入(綠色)澆鑄框架，同時將框架放置在平麵上(如實驗室工作台)
• 打開“門”，把盤子鎖在適當的位置
• 用你的手指感受盤子的底部——當正確對齊時，兩個玻璃盤子應該完全平行
• 將鑄造架安裝在透明支架上，向腔內注少許水，檢查是否滲漏
• 把水倒出來(不要拆卸裝置)，然後準備倒入丙烯酰胺混合物

覆蓋分離凝膠

通常的做法是，在凝膠聚合之前，在分離凝膠上覆蓋一層“液體”，以確保兩層之間的界麵均勻。這是很重要的，以確保你的樣品是在相同的起點，因為他們開始沿著分離凝膠比賽。

這種“液體”可以是異丙醇、乙醇或水。如果你使用的是有機溶劑，確保你清除任何殘留滴濾紙後，分離凝膠設置。如果你用的是水，確保你慢慢地覆蓋它，否則它會直接與丙烯酰胺混合(但好的一麵是，你不必太擔心殘留的水)。在任何情況下，保持這層“液體”每75mm厚的迷你凝膠500 μ l以下。

組裝盒式(第二檢查點，防止泄漏)

我們在這裏討論的是另一種類型的泄漏，即運行的緩衝液從陰極泄漏到陽極，或者如我們所知，從內室泄漏到外室。

重要的是，當緩衝層在陰極中運行較低時，當阻力建立時，要停止泄漏。這將導致整個凝膠係統迅速升溫，導致:

• 微笑/皺眉凝膠
• 弄髒的車道
• 解離sds抗複合物，否則可以在凝膠上觀察到!

事實上，防止凝膠係統滲漏是很容易的。確保玻璃板上沒有凝膠碎片，玻璃板牢固地壓在墊片上的橡膠管上。關鍵是板與油管之間的接觸。保持良好的接觸，避免泄漏。

如果你對此有點懷疑(就像我一樣!)，把陰極裝滿水，看看兩分鍾後是否有明顯的水位下降。如果沒有，你可以去!

了解重用緩衝區的風險

重複使用你的凝膠運行緩衝液是經濟的，但是你儲存這些緩衝液的時間越長，重複使用的次數越多，汙染的幾率就越高。在最糟糕的情況下，你會在你的凝膠上看到垃圾或非特定的條帶，即使是在空車道上。為了避免這種情況，使用新鮮的緩衝液為陰極(內室)，以使凝膠始終運行在幹淨的緩衝液。

不要為了速度而犧牲你的凝膠

越高電壓/電流/功率你用它來運行凝膠，你的樣品遷移得越快，但它也更有可能煮沸你的凝膠。

為了防止凝膠過熱，請參考製造商的說明，選擇合理的電壓。記住要注意不同成分的凝膠所需要的特定條件。

運行後，用你的手指(拔掉插頭，戴上手套!!)感受陰極中的緩衝，以檢查設置是否過熱。

如果你想快速使用凝膠，可以考慮在凝膠罐裏放一個冰袋，或者把整個裝置移到冰冷的房間．

不要把凝膠弄破

一切都歸結於此。你的SDS-PAGE完成了，你需要從玻璃板上取下精致的凝膠。用刮板輕輕地將兩片玻璃分開。不要違背自然規律——讓你的凝膠選擇它想堅持的哪一邊。再次借助刮板，輕輕地將凝膠滑出到容器中。練習(和耐心)造就完美。

當使用非常精細的凝膠(低比例/梯度凝膠)時，這裏有一個方便的技巧:在你把玻璃板分開後，把有凝膠的盤子放在緩慢流動的水中，用一個容器抓住滑動的凝膠。

好了，一個完美運行的凝膠，可與昂貴的預製凝膠相媲美。想象一下，當你把每一種凝膠都做到完美時，你將節省多少時間和精力。

好運！

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