如何儲存濃縮蛋白質

和研究生一樣，蛋白質對粗暴處理也很敏感。當他們(蛋白質，而不是學生!)被濃縮、純化和儲存時，情況尤其如此。我們已經介紹了濃縮蛋白質的許多選擇，以及如何處理蛋白質提取物以防止蛋白質降解。

但即使在你提取和濃縮蛋白質之後，它們也會降解!儲存本身會導致蛋白質分解、聚集和失活。雖然有許多存儲選項，但每種都有其利弊。因此，為了幫助您在儲存期間保持蛋白質的安全，我們將向您概述儲存選項以及六個快速方便的提示!

存儲選項

1.儲存在4°C的溶液中

把濃縮的蛋白質放在簡單的溶液中(比如PBS)，放在聚丙烯管裏或幹淨的玻璃器皿裏，放在冰箱裏。

• 優點:您的蛋白質很容易獲得，可以快速加熱進行分析。此外，您可以從同一瓶中重新取樣，而不必擔心自由解凍周期會加速降解。
• 缺點:在這裏，微生物汙染、蛋白質水解和氧化是你的敵人，這要歸功於重新采樣時更高的溫度和環境暴露。為了避免這種情況，你可以等量儲存蛋白質蛋白酶抑製劑，抗菌劑和還原劑(見下麵的六個方便提示)。此外，你應該計劃在這個溫度下儲存不到一個月就把蛋白質扔掉。

2.儲存在含有冷凍保護劑的溶液中，保存在-20°C

將蛋白質保存在含有25 - 50% (w/v)甘油或乙二醇的溶液中冷凍。

• 優點:首先，在這個較低的溫度下，你的蛋白質更能抵抗微生物汙染、蛋白酶降解和氧化。用甘油或乙二醇稀釋它們將使它們保持在溶液中，使您可以輕鬆地重新取樣。此外，以這種方式儲存的蛋白質可以保存長達一年。這是抗體偶聯物的一個很好的整體選擇。
• 缺點:蛋白質在-20°C的溶液中仍可能受到蛋白質水解、汙染和氧化。同樣，aliquote，抑製劑和還原劑是你的朋友。請記住，用高達50%的冷凍保護劑稀釋樣品可能是不可取的，這取決於你接下來要做什麼。

3.在-80°C或液氮中冷凍

快速冷凍一次性使用的蛋白質，並保持冷凍狀態。

• 優點:在冷凍溫度和缺乏重新采樣之間，這是長期儲存(多年)的絕佳選擇。此外，你通常不需要用化學物質(甘油、疊氮化鈉等)稀釋或汙染你的蛋白質，以保護它免受降解和微生物的侵害。隻要確保你有合適的液氮安全培訓先!
• 缺點:與前麵提到的基於溶液的選擇不同，冷凍蛋白應被視為一次性使用，以避免反複凍融循環的降解。此外，抗體偶聯物(特別是堿性磷酸酶偶聯物)在冷凍後可能不起作用。

使凍幹

將你的蛋白質脫水成粉末，在冰箱裏無限期儲存。

• 優點:首先，你的蛋白質將免受水解和其他形式的化學降解，這可能發生在水中。此外，凍幹蛋白比溶液占用更少的空間，適合長期儲存(數年)。
• 缺點:你需要一台凍幹機(或者你的朋友有一台)。然而，請記住，與細胞膜相關的蛋白質可能無法進行凍幹，因為它們很容易被凍幹破壞。同樣，並非所有的蛋白質都能通過凍幹保持穩定;它們可能變性，這降低了它們的用途和再溶解的能力。此外，一些蛋白質可能需要用蔗糖、甘露醇或牛血清白蛋白來穩定。

6個小竅門!

1. 整除。無論是冷凍還是溶液，都要將蛋白質放入一次性試管中，以避免凍融並降低汙染風險。
2. 集中精神。稀釋後的蛋白質更容易與塑料或玻璃結合。為了避免這種情況，可以將它們濃縮到100毫克/毫升，或者添加“填充物”，如BSA來減少結合。
3. Cryoprotect。通過添加25 - 50% (v/v)的甘油或乙二醇來穩定蛋白質並防止結冰。
4. 抑製微生物生長。加入硫柳汞(0.01% w/v)或疊氮化鈉(0.05% w/v)以減少微生物生長。
5. 抑製蛋白酶。通過添加減少蛋白質降解蛋白酶抑製劑(如EDTA, PMSF)。
6. 停止半胱氨酸氧化．保護你的-SH組!加入1 - 5mm的還原劑(如DTT, 2-巰基乙醇)。

我們希望這些建議能讓你的蛋白質安全可靠!要了解更多關於儲存蛋白質的知識，請查看下麵的參考資料!另外，如果你有任何這裏沒有提到的建議，請在評論區寫下它們!

參考文獻

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純化蛋白質的儲存。蛋白質表達和純化核心設施，歐洲分子生物學實驗室。