改正你的行為!如何清理PCR汙染

你小心翼翼地設置好PCR，興奮地等待它完成，檢測凝膠，等待重大發現。但你看到的並不是你所希望的(一種漂亮幹淨的凝膠)，而是一團亂麻——額外的帶子，最令人不安的是，在你的陰性對照中，還有帶子。那麼，你打算怎麼做?你如何修複這種PCR汙染，並在未來避免它?

什麼是PCR汙染?

PCR汙染的最大來源是霧化PCR產物，這是當你打開試管或移液管放大PCR產物時產生的。這些小水滴一旦形成，就能很好地傳播。這些微小的液滴很容易擴散到你的長凳和設備上，在那裏它們可以找到進入下一個PCR的方法並被放大。現在你知道了什麼PCR汙染是由。你怎麼知道你是否有這種病?

運行負控製

我們知道我們應該總是進行陰性對照。然而，有時我們為不這麼做辯護。我們會想出這樣的理由:“這個實驗總是有效的!，“我可以節省試劑”，或者“我沒有時間”。但從來之不易的經驗來看:總是運行你該死的負麵控製!如果沒有陰性對照，PCR汙染可能潛伏一段時間而不被發現，攪亂實驗，浪費你的時間在排除故障，並慢慢蔓延到你的實驗室。所以，不要變得過於自信，也不要為你的懶惰辯解，隻要進行你的消極控製，因為這樣你就會知道你是否有汙染。

PCR陰性對照通常隻是正常的PCR主混合物(聚合酶，引物，緩衝物，核苷酸)，但不是添加模板，而是添加水。這將導致沒有PCR產物和一個空的凝膠通道。因此，如果你確實得到了一個帶，你知道你有汙染…某處。

確定汙染源

汙染從何而來?嗯,真的。它可能來自1)你的實驗室環境比如你的移液管、機頭、手、台式、離心機等等，或者2)你的試劑比如你的聚合酶，緩衝液，核苷酸，水和其他試劑。

1)排除實驗室環境

首先，在追蹤PCR汙染時，要清除所有可能的環境來源。要做到這一點，你應該:
用10%的漂白劑溶液或脫氧核糖核酸清洗劑擦拭你的:

• 台式
• 吸量管
• 離心機
• 渦
• 架
• 熱瓶蓋和按鈕

獲得新的:

• 未開封的濾嘴盒
• 未開封的無菌PCR試管

正確組裝PCR反應:

• 穿一件專用的實驗服。你應該穿一件專門用於PCR設置的白大褂。這不應該(!)是你在分析PCR結果時穿的同一件外套。這種塗層不能靠近打開的PCR擴增產物試管。
• 經常更換手套。如果你離開PCR裝置和專用設備去做任何事情——獲取更多試劑，接聽電話，使用筆——在回到裝置前更換手套。
• 隻使用專用設備。當建立PCR時，你使用的移液器、離心機和漩渦應該專門用於PCR建立。任何擴增的PCR產物都不能靠近它們。

2)排除試劑

現在，您已經將任何新的PCR汙染引入到您的PCR組裝中，是時候檢查試劑了。這意味著係統地用一種新的(以前未開封的)試劑替換每一種舊試劑，並重新進行陰性對照。任何去除汙染帶的替換都是被汙染的試劑，應該丟棄。

避免未來汙染

為了避免未來的汙染，你應該做以上所有的事情和其他一些事情:

• 在專門的空間工作。將PCR設置在遠離分析結果的地方。這是最好在一個兜帽，或至少在長凳上，遠離你運行凝膠。
• PCR試劑和PCR產物分開存放。同樣的，你不希望你的PCR分析靠近你的設置，你不應該把PCR產物和試劑放在一起。盡可能使用單獨的冰箱。
• 整除。無論你多麼小心，汙染仍然可能發生。汙染不僅要花費時間，而且要花費金錢，因為你必須扔掉任何被汙染的試劑。如果試劑是新的，那就意味著300美元直接扔進垃圾桶!因此，隻要有可能，將試劑放入更小的試管中，一次隻使用一個試管。這不僅可以幫助您處理汙染，而且還可以通過減少冷凍/解凍循環的次數來延長試劑的壽命。
• PCR管/針尖/架子分開存放。要保持PCR試劑的清潔，請遠離PCR試劑。給所有PCR設備貼上標簽，並告訴其他實驗室成員尊重他們的標識。
• 不要彈開你的管子。不要“輕彈”你的PCR管打開，盡量減少你的PCR產物的霧化。我知道用一隻手打開管子的速度更快，用拇指輕輕彈開蓋子，但這是一種糟糕的形式，會導致長凳的汙染。不要著急，用兩隻手小心地打開所有PCR產物管。
• 使用主攪拌器，最後添加模板。處理模板的次數越少，汙染的機會就越少。因此，您應該始終使用主混合物(按順序):水，緩衝液，核苷酸，引物，聚合酶，最後，模板。
• 培訓他人。你實驗室的清潔程度取決於你最弱的實驗室成員。告訴其他人有關PCR汙染的情況，以及需要避免汙染的步驟。嘿，你甚至可以把這篇文章打印出來和他們分享。

祝你好運，PCR-ing快樂!

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