如何製作自己的ECL

ECL可能是實驗室中的昂貴試劑，並且它參與了Western印跡的最後階段，這是您不想擔心太多的事情。在我的博士學位期間，我很喜歡我的Western汙點，似乎我做對了一切，我隻是在暗室裏沒有任何信號。當時我正在使用預製的ECL和一個與我共享實驗室空間的朋友，建議我嚐試她的自製啤酒。起初我持懷疑態度，但後來我從暗室裏出來，臉上露出最大的笑容 - 我的電影中有一個史詩般的信號！從那以後，我的實驗室使用了這種簡單，非常便宜的自製食譜，我們還沒有回頭。

為什麼不在實驗室中製作自己的ECL？費用（如果您假設已經有過氧化氫可用的供應）約為50英鎊（70美元），這比許多預製套件便宜得多，這可能會花費數百美元/磅。在實驗室中讓所有試劑都可以使用，這也意味著如果您擔心自己的股票已減少，您可以輕鬆地組成更多的東西 - 無需等待其他訂單即可通過！

你需要：

• Luminol（在DMSO中最多組成250mm，在-20°C下存放在黑暗中）。可從Sigma Aldrich£47.10/$ 72.90。
• p-豆酸（在DMSO中最多組成90mm，在-20°C下存放在黑暗中）。可從Sigma Aldrich£6.72/$ 10.40。
• 30％過氧化氫
• 1M Tris-HCl pH 8.5
• 蒸餾水

方法：

取兩個容器（它們需要是安全蓋的東西，您可以遠離光線），並標記一個“ A”和一個“ B”。

在第一個管（a）中，結合以下內容：

• 1 ml盧米諾溶液
• 0.44毫升香豆酸溶液
• 10毫升Tris-HCl 1M，pH 8.5
• 蒸餾水，最終體積100毫升

在第二管（b）中，結合以下內容：

• 64 µL過氧化氫
• 10毫升Tris-HCl 1M，pH 8.5
• 蒸餾水，最終體積100毫升

貯存：將這兩種溶液保持在4°C的黑暗中。我曾經用鋁箔包裹解決方案，以使光線遠離它們或將其放在深色的玻璃瓶中。

保質期：如果正確存儲，該解決方案通常持續長達1-2個月。如果您擔心它坐在冰箱裏太久了，那麼最好做更多。

筆記：You can easily halve or quarter the volumes of solutions described here if you want less than 100 ml each of solutions A and B—if your lab only does western blots sporadically, this may be useful to you, as it’ll waste less solution if it goes off in between experiments.

使用：

這種自製的ECL的使用方式與預製的ECL相同。將等量的每種溶液組合在單獨的管中並混合。用溶液蓋住您的印跡，然後離開1分鍾，然後排除液體，然後將其暴露於膠片上。

十分簡單！希望這種快速，簡單和廉價的解決方案對您有幫助！

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最初於2012年6月29日發布。2015年7月13日更新和修訂。