如何在Western Blotting中保存樣品

當進行定量Western blot時，樣品製備的一致性是至關重要的。當你將一個樣品中不完全的蛋白質提取與提取更徹底的樣品中的蛋白質含量進行比較時，會使你的結果產生偏差。在蛋白質提取後，重要的是要以相同的方式處理樣本，以防止蛋白質降解對它們的影響不一樣。以下是一些關於如何處理和保存蛋白質樣本用於Western blotting的建議:

工作很快

快速工作可以減少樣品降解的時間，從而最大限度地減少對樣品的潛在損害。如果你收集的樣本不會立即處理，請盡快在液氮中快速冷凍- - - - - -但是要確保你意識到液態氮的危險確保你在實驗室裏安全使用。

或者，立即處理樣品，並盡快使用或冷凍樣品。將加工過的樣品保存在-80°C是很重要的，因為一些蛋白質在-20°C仍然會發生降解。

一切保持涼爽

熱是蛋白質在溶液中的敵人，因為蛋白酶在較高的溫度下活躍。出於這個原因，保持材料和樣品的涼爽將有助於防止降解。如果你正在用研缽和研杵研磨樣品來提取蛋白質，用液氮預先冷卻研缽和研杵，以確保它們保持低溫。永遠把你的管子放在冰上，並考慮在冷藏室工作讓你的架子和其他工具保持涼爽。凝膠也可以在冷室中運行，如果你有特別敏感的樣品，你可以在運行設備中預冷運行緩衝液一夜。

使用蛋白酶抑製劑

即使盡可能謹慎，蛋白酶仍然可能影響你的樣品。作為一種額外的預防措施，通常添加蛋白酶抑製劑你的樣品。像PefaBloc(又名AESBF)這樣的蛋白酶抑製劑是單獨出售的，所以你可以針對一類蛋白酶。一個更簡單的方法是使用蛋白酶抑製劑雞尾酒片，很多公司都可以買到這些來自Sigma Aldrich)，並抑製廣泛的蛋白酶。

來源:一個偉大的視頻阿格裏塞拉的書，裏麵充滿了高效Western blotting的技巧。