如何製作自己的ECL
ECL可能是實驗室中的昂貴試劑,並且它參與了Western印跡的最後階段,這是您不想擔心太多的事情。在我的博士學位期間,我一直在努力奮鬥的蛋白質印跡 - 看來我做對了一切,我隻是在黑暗的房間裏沒有得到任何信號。當時我正在使用預製的ECL,並與我共享實驗室空間的朋友建議我嚐試她的自製啤酒。起初我持懷疑態度,但後來我從黑暗的房間裏出來,臉上露出最大的笑容 - 我的電影中有一個史詩般的信號!從那以後,我的實驗室使用了這種簡單且非常便宜的自製食譜,我們還沒有回頭。
在實驗室中製作自己的ECL的成本(如果您假設您已經有過氧化氫的供應)約為50英鎊(70美元),這比許多預製套件便宜得多,可以花費很多錢數百美元/磅。在實驗室中讓所有試劑都可以使用,這也意味著如果您擔心自己的股票已經消失了 - 無需等待其他訂單即可通過!
你需要:
- Luminol(在DMSO中最多組成250mm,在-20°C下存放在黑暗中)。可從西格瑪從43.10英鎊/$ 63.20起。
- p-豆酸(在DMSO中最多組成90mm,在-20°C下存放在黑暗中)。可從西格瑪從5.70英鎊/$ 8.40起。
- 30%過氧化氫
- 1M Tris-HCl pH 8.5
- 蒸餾水
方法:
取兩個容器(它們需要是安全蓋的東西,您可以遠離光線),並標記一個“ A”和一個“ B”。
在第一個管(a)中,結合以下內容:
- 1 ml盧米諾溶液
- 0.44毫升香豆酸溶液
- 10毫升Tris-HCl 1M,pH 8.5
- 蒸餾水,最終體積100毫升
在第二管(b)中,結合以下內容:
- 64 µL過氧化氫
- 10毫升Tris-HCl 1M,pH 8.5
- 蒸餾水,最終體積100毫升
貯存:將這兩種溶液保持在4°C的黑暗中。我曾經用鋁箔包裹解決方案,以使光線遠離它們,或者將它們放在深色的玻璃瓶中。
保質期:如果正確存儲,該解決方案通常持續長達1-2個月。如果您擔心它坐在冰箱裏太久了,那麼最好做更多。
筆記:You can easily halve or quarter the volumes of solutions described here if you want less than 100 ml each of solutions A and B – if your lab only does western blots sporadically, this may be useful to you, as it’ll waste less solution if it goes off in between experiments.
使用:
本自製的ECL的使用方式與預製的ECL相同。將等量的每種溶液組合在單獨的管中並混合。用溶液蓋住您的印跡,然後離開1分鍾,然後排除液體並暴露於膜。
簡單的peasey!希望這種快速,簡單和廉價的解決方案對您有幫助!
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4條評論
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你一定是登錄發表評論。
你好
如何使檢測蛋白質的FEMTO克非常敏感?
謝謝
巴巴克
我也喜歡了解TVIS問題的Anser。公司是弱表達蛋白質的Boe Maling細胞外敏感性ECL,我敢打賭,這隻需要更改此食譜的簡單參數。有人知道要更改哪些參數以及如何更改?請回答 :-)。親切的問候,沮喪的博士後#1973
很棒的食譜,Steffi。您是對的,使用自製的ECL可以節省大量資金,並且與商店購買的東西一樣好。
謝謝!當它如此簡單且便宜地製作自己的解決方案時,花很多錢就愚蠢了!