如何得到一個完美無瑕的瓊脂糖凝膠

每個實驗室都有自己的做事的方法,和一些標準,不太關注他們。這當然是瓊脂糖凝膠。

瓊脂糖凝膠在生物實驗室是一個多功能的工具;你使用之前檢查質粒的準備DNA提取PCR結果,新克隆…所以瓊脂糖凝膠的許多用途你經常不認為運行它們的最好辦法。

但是當你凝膠的形象看起來不漂亮,你會希望你把這些額外的五分鍾之前開始,通過更徹底地認為它。

我已去過某處或經曆過某事。這裏有一些起點思考的東西(最好是在你開始之前,而且如果你最終可怕的凝膠圖片,不知道為什麼),每次都完美無瑕的凝膠。

前提示故障排除瓊脂糖凝膠

此種不此種:選擇合適的緩衝區

最受歡迎的緩衝區TAE (Tris-Acetate-EDTA)和此種(Tris-Borate-EDTA)。你需要緩衝準備凝膠和填滿室的凝膠將運行。

一般來說,實驗室傾向於用一種,但它是很高興知道的差異所以你可以做出適當的選擇為您的特定的凝膠。幾點要考慮當選擇一個緩衝區包括:

• TAE最適合更大的DNA片段,而此種最適合小的DNA片段,因為它提供了更大的分辨率。
• 此種有更大的緩衝能力,建議不再凝膠運行;然而,硼酸在此種酶抑製劑,因此,如果您計劃使用任何下遊應用TAE的DNA是路要走。
• TAE更加穩定的股票,而此種股票可以在幾周內沉澱(提示:我通常使用此種化驗,所以我一定要準備少量的5 x股票避免沉澱)。

確保你考慮這些差異在選擇最好的緩衝區分析的目的。

保持新鮮的緩衝區(…)

後決定緩衝區將最適合你的實驗,你應該總是有一個新鮮的整除準備你的凝膠和運行它。

新鮮的,我的意思是剛稀釋緩衝,還沒有使用過。是好有庫存5或10 x緩衝TAE的(或更高版本),但在使用前一定要稀釋它。

不重用以前的緩衝運行——從上所節省的時間不是編造新的緩衝區將微不足道不得不再次運行整個實驗得到一個可用的圖片。當我開始隻使用新鮮的緩衝區,我開始變得更清晰,更帶在我的樣品。耶!

讓凝膠時間

這是最重要的提示:不要著急一個瓊脂糖凝膠!你不想讓你的美麗克隆結果給毀了一個可怕的照片隻是因為你在趕時間。

你必須運行您的凝膠在75 v並確保緩衝不過熱。你可以減少冷卻過熱的風險緩衝和/或凝膠在運行之前,或運行中的凝膠冰冷的房間。

小心大凝膠:他們可能會得到溫暖的中心,而邊緣很酷。塗抹的主要原因之一,不帶緩衝的溫度。你可以(也應該)避免通過保持一個常數大約50 v到75 v的電壓。

演講很重要

記住,你的結果是隻有你存在的方式。沒有辦法說服你的老板,一個糟糕的凝膠圖像足夠僅僅因為片段“有”。不要浪費時間你能得到的數據通過衝凝膠跑一步!

故障排除瓊脂糖凝膠你有什麼建議嗎?在評論中與我們分享!

資源

1. 丹尼爾D。瓊脂糖凝膠電泳。當前免疫學的協議。1992;2 (1):10.4.1-10.4.8