一個DIY隔離酵母基因組DNA的方法

我最近搬到一個不同的研究所和很高興發現我的新實驗室已經不是一個而是多個不同酵母基因組的工具DNA隔離。我喜歡嚐試新工具和協議。我特別喜歡嚐試新工具時承諾,像奧運會一樣,產生的結果是“更快,更高,更強”。然而,在這種情況下,我應該警覺的各種各樣的工具,而不是鼓勵。一組包意味著人們在實驗室裏仍然在尋找。

第二個警告標誌應該是“把細菌細胞…”在一個工具包的協議。這句話顯然被複製從一個細菌手冊。雖然細菌和酵母是單細胞生物,他們不是可互換。例如,酵母細胞核和cytoskeleton-unlike細菌細胞。

最後,其中一個包未能產生合理的DNA質量。其他裝備導致可用的DNA,但低濃度。我labmates獲得類似的結果。我想我會堅持嚐試和真正的DIY準備一段時間。

為什麼要使用DNA DIY方法隔離?

與包、沒有適當試劑DIY協議。你知道到底是什麼在每個試劑。知道你的試劑使故障排除的構成更加容易。您可以測試或購買新組件的解決方案。同樣,你可以隻使用核糖核酸酶的數量你需要在每一個反應,這是實驗室的預算更加友好。你也可以定製方法。如果你沒有得到一個合適的收益,你可以增加細胞的數量開始或增加乙醇沉澱時間步驟9。

這個協議是最初提出作為恢複質粒的方法從yeast-you簡單變換幾毫升的準備大腸杆菌但現在經常使用的整個基因組DNA提取。

diy協議酵母基因組DNA隔離

1. 增長10毫升酵母文化YPD 30°C到飽和,一夜之間最好。
2. 通過離心收集細胞,把管在冰上。
3. 輕輕倒出上層清液和暫停顆粒0.5毫升的水。細胞轉移到1.5毫升有螺旋蓋的管。
4. 通過離心收集細胞。輕輕倒出上層清液和暫停細胞顆粒殘餘液體的渦流。
5. 添加0.3毫升的解決方案C: 2% Triton x - 100, 1% SDS, 100毫米氯化鈉,10毫米Tris-HCl (pH值8),1毫米EDTA。
6. 添加0.3毫升的苯酚:氯仿:isoamylalcohol。
7. 添加足夠的酸洗或鋯珠管這珠子上麵的液體是2 - 3毫米。打破細胞由渦流開放。
8. 添加0.2毫升的TE (pH值8.0)。渦15秒。確保一切都是好壞參半。
9. 在13000轉離心細胞5分鍾。頂部水層轉移到一個新管。(前麵的管應該處理苯酚本。)
10. 在新的管水分數,加1毫升100%乙醇和混合反演。在-20°C離開30分鍾。
11. 離心機在13000 rpm管10分鍾和丟棄上層清液。
12. 暫停顆粒,這主要是RNA在這一點上,在0.4毫升的TE。然後,添加3µL 10毫克/毫升的核糖核酸酶的解決方案。
13. 孵化地鐵15分鍾37°C。加10µL 3 M的pH值5.2和乙酸鈉混合。
14. 再加1毫升的100%乙醇和混合反演。
15. 離心機在13000 rpm管10分鍾和丟棄上層清液。
16. 空氣幹燥顆粒大約10分鍾。與70%乙醇洗丸,離心機短暫,去除乙醇通過減壓或吸氣吸管。
17. 大約10分鍾再風幹。這次暫停在50µL水丸。

最終的DNA濃度應該約0.5µg /µl。

消息提醒:該協議其他酵母群體傳播,也在我們的實驗室工作…的DIY方法分離酵母的方法是捕捉:更快,更高,更強!

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