氨苄西林的選擇有什麼問題?

氨苄西林耐藥通常作為基因克隆和蛋白表達質粒的選擇標記大腸杆菌還有其他細菌。雖然它可能是一個非常有用的工具，但如果您計劃使用它，則需要注意使用此選擇標記可能存在的問題。本文簡要介紹了這些限製以及如何避免這些限製。

氨苄青黴素的選擇是如何起作用的

氨苄西林選擇的基礎是由質粒表達的β -內酰胺酶水解和滅活抗生素bla基因。問題是:大量產生的-內酰胺酶也被細菌分泌到培養基中。如果培養處理不當，由此產生的細胞外-內酰胺酶的積聚可使培養基中的氨苄青黴素失活，從而消除了選擇壓力。

在液體培養中，這意味著一部分(可能是非常大的一部分)細胞可能不再具有質粒，從而導致質粒製劑產量低，蛋白表達差等。在瓊脂平板上，氨苄西林降解可導致衛星菌落的形成。這些是沒有占據質粒的非常小的細胞集落在占據質粒的大集落周圍形成bla含有質粒。衛星的形成是因為β -內酰胺酶釋放bla-表達菌群降解菌群附近的氨苄青黴素。這些衛星並不一定是個問題，因為當它們轉移到含有新鮮氨苄青黴素的培養基中時，它們不會生長。

避免質粒丟失

如果你注意到你的質粒製劑產量低或者低於理想的蛋白質表達，β -內酰胺酶積聚可能是你的問題。那麼，當使用氨苄青黴素作為選擇標記時，如何避免質粒丟失呢?方法如下:

• 不要讓液體培養飽和太久。我建議不要培養高於OD值的培養物₆₀₀= 3(在溶原肉湯中，也稱為LB)。
• 從發酵劑中去除分泌-內酰胺酶。這可以通過將發酵劑在新鮮的、無抗生素的培養基中製成顆粒並重新懸浮，然後再接種主培養物來實現。
• 如果你遇到問題，使用更高濃度的氨苄青黴素。我建議使用200克/毫升或更高。這使得β -內酰胺酶更難滅活所有的氨苄青黴素，尤其有助於避免衛星的形成。
• 千萬不要使用舊的氨苄西林儲存罐或盤子，因為氨苄西林會發生一定程度的分解，從而降低氨苄西林的有效濃度。有關如何儲存和使用抗生素的更多信息，請閱讀我們的相關文章抗生素穩定性:保持你的藥粉幹燥．
• 如果以上方法都失敗了，改用卡本西林。雖然這種抗生素也被-內酰胺酶滅活，但這個過程比氨苄青黴素慢得多。因此，卡苄西林的選擇遠比氨苄西林有效。不幸的是，它要貴得多!

氨苄西林隻是分子生物學中使用的多種抗生素之一。如果你想了解其他常用抗生素的信息，請查看我們的文章分子生物學中的抗生素．

你對使用氨苄青黴素有什麼建議嗎?如果有，請留下評論。

最初發表於2011年5月9日。2019年12月17日修訂更新。