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納米滴™分光光度計的優勢和局限性
使用NanoDrop分光光度計,定量DNA, RNA或蛋白質樣本濃度是很容易的。以下是您需要了解的關於這個便利規範的優點和局限性的一切內容。
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DNA提取試劑盒如何在實驗室工作
了解DNA提取套件的工作原理是解決提取問題的關鍵。
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排除體外轉錄故障的頂級提示
當我第一次合成RNA原位探針時,我第一次經曆了體外轉錄的故障排除。一位實驗室夥伴不祥地警告我說,我剛剛在一場流感後回到實驗室,這意味著我是一個行走的、會說話的rna工廠。我繼續……
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快速結紮:釘住秘密
連夜結紮是不方便的——尤其是當結紮失敗的時候。幸運的是,有一種直接的方法可以加快DNA連接。這篇文章強調了加快結紮反應的秘密成分,並提供了一些使用的提示和注意事項。關於DNA結紮的概覽,請看這裏和這裏。買一個快速結紮套件最…
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CRISPR基因組編輯:你需要知道的開始
了解一下CRISPR能為你做什麼,以及使用它涉及到什麼。
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如何點亮你的生活-提示和技巧,以排除您的熒光素酶化驗。
什麼是熒光素酶檢測?它的用途是什麼?熒光素酶的測定利用了某些生物的先天發光特性,最顯著的是螢火蟲。在熒光素酶存在的情況下,螢火蟲可以將熒光素轉化為氧化熒光素來發光。使用熒光素酶最常見的科學分析是報告分析…
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獲得質粒後要檢查的三件重要事情
你有了一個新的質粒,現在該怎麼做?你很高興能進一步推進你的項目。但在繼續之前,必須確認插入的存在以及插入的順序和方向。插入的尺寸合適嗎?大多數人使用限製性內切酶…
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更快,更酷的DNA凝膠!
2008年,當我開始攻讀碩士學位時,我最討厭的實驗室任務是用瓊脂糖凝膠提取DNA。如此簡單、無處不在、必不可少的東西,在實驗室裏耗費了我數不清的時間。即使我們把DNA染色直接加到熔融瓊脂糖中,也沒有…
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比較病毒載體表達係統
有些病毒載體是克隆和表達實驗的小黑裙:它們幾乎適用於任何場合,總能給你想要的結果。其他載體更像是隻有在特殊場合才會從倉庫裏拿出來的舞會禮服。讓我們瀏覽一下所有的信息,然後……
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快速參考:測定DNA濃度和純度
測定DNA濃度和純度最全麵的方法是同時使用紫外分光光度法和瓊脂糖凝膠電泳法。這篇快速參考指南概述了可以從這兩方麵獲得的信息。紫外分光光度法測定DNA濃度和DNA本身的純度,以及大多數常見的汙染物在…
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燃燒明亮:溴化乙錠DNA染色簡史
幾十年來,溴化乙胺(EtBr)一直是分子生物學家用於DNA染色的默認染料。現在,EtBr正被載入史冊。是時候從曆史的角度看看這一切是從哪裏開始的了。
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氨苄青黴素的選擇有什麼問題?
有沒有想過,那些像衛星一樣的小菌落,圍繞著你的LB上的氨苄西林培養皿上更大的大腸杆菌菌落是什麼?或者為什麼,當你選擇那個菌落時,它從來沒有你剛剛轉化的質粒?這是因為這些衛星菌落被大菌落“保護”不受氨苄西林的影響。繼續往下讀……氨苄西林……
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南方(汙點)曝光仍然是一種有用的技術
在最近的一次會議上,我問兩位分子生物學博士,他們上一次使用Southern blot是什麼時候。在一陣無拘無束的大笑之後,他們問道:“到底是誰還在這麼做?”“也許是為了一種非常非常特別的用途吧,”其中一位科學家猜測道。當我問那個教我…
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準備好,設置,複古-如何開始與逆轉錄病毒轉導
逆轉錄病毒轉導正成為基因傳遞到哺乳動物細胞的流行選擇,與其他技術相比具有多種優勢。如果你決定開始研究這個有用的技術,下麵是你可以采取的步驟:第0步:獲得許可首先也是最重要的,你是否擁有工作的許可、授權和培訓……
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如何欺騙QuikChange™
為目標蛋白質生成單一和/或複合突變體的DNA載體庫是一項艱巨的任務。如果你足夠幸運,並且在一個資金充足的實驗室工作,你可能會通過基因合成將這個過程外包出去。但我們大多數人都需要用傳統的方式。傳統的QuikChange™,有很多步驟你…
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逆轉錄病毒——朋友還是敵人?
“逆轉錄病毒”一詞使人聯想到艾滋病毒、艾滋病大流行以及全世界為擊敗這一強大對手所作的絕望努力。但另一方麵,科學研究已經成功馴服了這種病毒,並將其作為進步的工具。逆轉錄病毒通常被用於將基因導入哺乳動物細胞中表達或敲除。
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從不友好的組織中提取RNA的4個技巧
有些紙巾很難用。在研究生院的最初幾年裏,我失去了這個真理,因為我的研究對象是肝髒樣本。如果你從肝髒樣本中提取RNA,你可能不會因為大量的RNA產量而失眠。但對於那些用不太願意的捐贈者做RNA提取的人來說,比如……
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關於限製性內切酶的六個事實
當限製以書麵文件和批準的形式出現時,我們厭惡它們。然而,當限製以酶的形式出現時,我們喜歡它們,不是嗎?限製性內切酶在生物技術研究中起著關鍵作用。閱讀以下關於限製性內切酶的六個有用事實。1.限製性內切酶對細菌是有益的。
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如何修複糟糕的克隆率
早上你打開孵化器,讓你沮喪的是,在你的載體控製盤上有100個美麗的菌落。雖然有許多潛在的原因,但我將重點介紹一些更可能的原因及其解決方案。
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不僅僅是一個聰明的名字:Northern Blots
你可能認為Northern Blots是一種過時的技術。然而,qRT-PCR容易出現假陽性和陰性,審稿人可能會要求Northern Blot對您的qRT-PCR結果進行確認。所以有時候北方黑斑是一種必要的邪惡。
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在你的RNA瓊脂糖凝膠中使用漂白劑戰勝RNA酶汙染
那麼,你已經提取了你寶貴的RNA,並想在凝膠上檢查它的質量。通常情況下,你會運行甲醛凝膠,這是混亂的,需要大量的準備工作。另外,如果你想做的隻是檢查質量…
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改進下一代測序文庫準備
文庫的數量和質量對下一代測序(NGS)實驗的成功至關重要。但是有很多因素會影響庫的產量和質量:轉化率、GC覆蓋率、低質量或低數量的輸入材料以及聚合酶鏈反應引入的偏差。所有這些,難道一個更短的協議不是更好嗎?你是否……
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嬰兒獲得BAC -與細菌人工染色體工作
雖然細菌人工染色體(BACs)的需求可能不像它們作為測序項目基礎時那麼大,但它們仍被廣泛用於各種項目。基於F的複製原點,BAC載體可以在單個質粒中穩定地維持高達300kb的序列,從而使它們自己…
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克隆圍捕
克隆可能是科學家生存的禍根。克隆很少是實驗的最終目標。一般來說,它是研究這段DNA做的有趣的事情的一種手段,比如表達蛋白質。這就是我們的切入點。我們有各種克隆的提示和技巧....
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對無縫連接克隆提取(SLiCE)進行了探索和解釋
傳統上,如果你希望克隆一個DNA/RNA片段(或插入)到一個載體,如BAC,你需要:昂貴的外切酶,稱為限製性內切酶:像吃豆人一樣的酶,咀嚼目標載體或插入片段的特定序列(通常隻是“插入”)。插入和目標向量之間的序列同源性,稱為…
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用毒素抗毒素克隆係統消除背景
“經典克隆”最令人討厭的特征之一是,在克隆後區分包含空向量的克隆和帶有插入的克隆的係統並不完善。即使當您的自連接控製板是空的,您也可以在“矢量+插入”板上有許多包含空矢量的菌落。即使是藍白色……
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提高克隆效率的簡單提示
自20世紀70年代初以來,分子克隆已經使用限製性內切酶從源DNA中分離片段,並線性化質粒載體。在純化插入物和載體並確保兩端兼容後,兩者在DNA連接酶的幫助下連接。然後用得到的重組載體將大腸杆菌宿主轉化成…
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選擇正確的質粒載體:初學者指南
如果你是第一次挑選可用的質粒載體的列表,決定最適合你的實驗可能是令人興奮的。你需要什麼克隆網站?哪些酶的限製位點?可能的插入尺寸是多少?讓我來告訴你需要注意哪些因素。
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DIY相分離凝膠:清潔和便宜!
從我的冒險中學習,為自己節省一些錢,享受美好的階段分離。遵循這個簡單的協議,製作一個幹淨和便宜的DIY相分離凝膠。
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把你的RNA準備工作搞砸的5種方法
與DNA不同的是,RNA是一個脆弱且容易降解的近親。在研究RNA一段時間後,人們對處理RNA變得非常偏執,因為即使是一個噴嚏或一滴唾液都可能潛在地影響結果。原因是有一種叫做rna的酶專門針對。
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細胞裂解101:8種方法打破細胞壁
在第1部分中,我介紹了細胞壁的類型以及它們是由什麼組成的——現在是時候學習如何穿過它們了。1.機械破壞細胞的方法機械破壞細胞的方法實際上就是:強行打開細胞壁,使細胞內的物質溢出。機械的優點是……
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細胞裂解101:你需要了解的5種細胞壁
當你試圖提取內容物時,你是否遇到過來自哺乳動物細胞係的抵抗?可能不會,因為破壞細胞膜很容易。然而細胞壁是另一回事。它們是堅硬的保護層,可以如此強大,以至於生物體為了保護而放棄運動!細胞壁存在於…
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像大象一樣碾壓,像雨一樣浸泡:老派的DNA凝膠提取
在我之前關於DNA凝膠提取的文章中,我解釋了大多數商業化的DNA凝膠提取試劑盒是如何工作的。然而,有一段時間,我們的社會還沒有這些便利的技術奇跡,科學家們不得不召喚“粉碎和浸泡”之神。這種方法已經被證明了幾千年,因為人們……
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如何計算DNA引物濃度
計算可能是實驗室工作的累贅。幸運的是,有很多簡單的方法可以幫助你做你在實驗室需要的數學。在這裏,我們告訴你不同的方法計算底漆濃度取決於起始材料。在所有的計算中,假設我們有22納摩爾的DNA引物……