如何做無包分娩

商業套件之於自製協議，就像電梯之於樓梯:它們應該工作得更快，並節省你的體力消耗。然而，在很多情況下，走樓梯(例如DIY方法)在某些方麵效果更好——而且總是更便宜。188bet手机版APPBitesize Bio此前已經發布了自製協議質粒minipreps．我想和大家分享一份無包孕備的方案，如果不是更快的話，也能更大的質粒DNA產量比我所知道的任何商業避孕藥都要多

1)在50 ml的選擇性培養基中接種並培養細菌。

2)離心取菌，取上清。在2ml TEG緩衝液(100mm Tris-HCl pH8, 2mm EDTA, 20%葡萄糖)中重懸顆粒。

3)加入4ml NS溶液(0.2M NaOH, 1% w/v SDS)，倒置混合。

4)加入2.5 ml 3M醋酸鈉，pH值5.3，倒置混合。

5)以最高速度(通常在4000rpm左右)旋轉15分鍾。如果離心後，管中仍有蛋清樣物質漂浮，幹擾上清的清除，則重複旋轉。

6)將上清轉移到新鮮的獵鷹管中，加入等量的異丙醇，倒置混合，旋轉15分鍾。

7)棄上清，用70%乙醇洗淨白色顆粒，晾幹15分鍾。

8)將含有大量RNA的顆粒重懸於0.5 ml TE中，加入5µL的10mg/ml RNAse a, 37°C孵育30分鍾。

9)將溶液轉移到新鮮的Eppendorf和苯酚提取物中，直到上下層之間的界麵是透明的(通常兩次就足夠了)。

10)在300 μ l TE中沉澱DNA，重懸。最終的DNA濃度通常為2-4 μ g/ l。

可以找到描述堿法提取DNA的原始出版物在這裏．

當然，我不喜歡這個方法的地方是苯酚提取，如果有人能提出替代方案，我會很高興。您對DIY核酸淨化協議有什麼看法?

要了解更多關於完成實驗的提示、技巧和技巧，請查看188bet手机版APP咬大小的生物DIY在實驗室中心．